牛分枝杆菌esat6和cfp10蛋白的表达及在临床检测中的应用

• 作者: 丁家波 刘来兴 张云飞 张亮 杨宏军 杨美 王基隆 解晓莉 韩猛
• 来源期刊: 山东农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛分枝杆菌 esat6和cfp10蛋白 皮肤变态反应 IFN-γ释放试验
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·蚕桑水产
• 页码范围: 120-123
• 页数: 4页
• 分类号: S858.23
• 字数: 2991字
• 语种: 中文
• DOI: 10.14083/j.issn.1001-4942.2017.11.023

摘要

本研究以牛分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,扩增esat6和cfp10基因,构建重组表达载体pET-32a(+)-esat6和pET-32a(+)-cfp10,并通过原核表达系统分别表达重组esat6和cfp10蛋白,经Ni-NTA亲和层析法纯化后,对目的蛋白进行SDS-PAGE和Western blot验证,BCA法测定目的蛋白浓度,最后将east6和cfp10蛋白混合后用于牛结核病临床检测,并对检测数据进行分析.结果表明,牛分枝杆菌esat6和cfp10蛋白在大肠杆菌系统中获得高效表达;其混合蛋白应用于结核病检测具有较高的特异性,且在皮肤变态反应和IFN-γ释放试验两种检测方法中具有较高的符合率.说明相较于提纯结核菌素(PPD),esat6和cfp10混合蛋白具有较高的特异性和稳定性,将有希望替代PPD用于牛结核病检测.