一种PCR产物克隆零背景T载体的构建

• 作者: 吕新 方志鹏 李晓琳 李玥仁 陈丽华
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 医学
• 关键词: PCR产物克隆 零背景 T载体
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 312-316
• 页数: 5页
• 分类号: R346
• 字数: 4940字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2017.03.016

摘要

为解决平末端加T法构建的T载体,在PCR产物克隆时连接效率低、阳性克隆筛选困难的问题,本研究在利用Taq DNA聚合酶末端转移酶活性对线性化平末端pBluescript SK (+)载体3′-端进行加T反应后,使用T4 DNA连接酶处理加T后pBS载体,使3′-端未加T平末端载体重新形成超螺旋状态,而3′-端加T载体则保持线性化状态,在琼脂糖电泳时切胶回收3 000 bp处DNA片段,成为pBS-T载体.使用构建的pBS-T载体分别克隆500 bp和1 000 bp PCR片段,pBS-T载体克隆效率达到100%,实现了对PCR产物的零背景克隆.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕新		18	98	6.0	9.0
3	陈丽华		6	4	1.0	1.0
7	方志鹏	厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心	20	48	4.0	6.0
10	李晓琳		1	0	0.0	0.0