诺如病毒NV衣壳蛋白VP1表达纯化及多克隆抗体的制备

• 作者: 井申荣 仉秋实 苑荣亮
• 来源期刊: 中国微生态学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 诺如病毒 VP1蛋白 多克隆抗体 真核表达
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 896-899,905
• 页数: 5页
• 分类号: R373.1
• 字数: 3972字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13381/j.cnki.cjm.201708007

摘要

目的 获得纯化的诺如病毒(NV)衣壳蛋白VP1,免疫动物制备多克隆抗体.方法 提取粪便样品中诺如病毒RNA,逆转录得到cDNA文库,通过PCR扩增获取VP1基因序列,构建到大肠埃希菌原核表达系统中诱导表达重组VP1蛋白.使用镍柱亲和层析法对重组蛋白进行纯化,十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和考马斯亮蓝法(BSA)对重组蛋白的纯度与浓度进行分析,以重组的VP1蛋白为抗原,免疫雄性SPF级SD大鼠获得多抗血清,用ELISA测定抗体效价、Western blot检测抗体特异性.结果 成功地构建出重组表达载体VP1-pET28a,并将其在大肠埃希菌BL21 (DE3)中稳定地表达诱导重组蛋白.ELISA测其多抗血清的平均效价为1∶200 000,Western blot检测抗体在原核和真核特异性很高.结论 本实验成功地利用原核表达系统表达诺如病毒衣壳蛋白VP1,为进一步研究诺如病毒的诊断和疫苗开发提供了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	井申荣	昆明理工大学医学院	89	229	8.0	12.0
2	苑荣亮	昆明理工大学医学院	5	11	2.0	3.0
3	仉秋实	昆明理工大学医学院	3	4	1.0	2.0