人Spsb1基因慢病毒干扰载体的构建及病毒包装

• 作者: 孙达权 徐国强 徐莹莹 李红梅 王筑婷 石松 莫晓川 雷霆雯
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肝肿瘤 慢病毒干扰载体 脂质体 转染 Spsb1基因
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 专题研究1
• 页码范围: 621-625
• 页数: 5页
• 分类号: R361.3
• 字数: 3000字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2017.06.002

摘要

目的:构建人Spsb1基因的shRNA慢病毒干扰载体,为研究该基因在肝癌细胞生长、增殖、转移和浸润中的作用打下前期基础.方法:根据shRNA的设计原则设计一段shRNA和阴性对照shRNA,化学合成DNA双链中的两条单链,通过退火和配对后与慢病毒干扰载体LV-3 (pGLVH1/GFP+ Puro)连接,阳性克隆子LV3-SPsb1测序鉴定;将LV3-Spsb1和辅助质粒pCMV-delta8.91/pCMV-VSVG共转染HEK293T细胞,转染后24 h在荧光显微镜下观察细胞转染效率;用转染后收集到的病毒液感染肝癌细胞SMMC-7721,荧光显微镜下观察细胞荧光;用1 mg/L嘌呤霉素杀死未感染的细胞,Western blot检测细胞内源性Spsb1基因表达量.结果:测序鉴定证明获得的LV3-Spsb1质粒是所需要的目的慢病毒shRNA干扰载体;通过与辅助质粒共转染HEK293T细胞后,细胞在荧光显微镜下发出明亮的绿色荧光,提示细胞转染效率较高;病毒液感染SMMC-7721后,细胞内出现绿色荧光,证明共转染系统可以成功包装shRNA-Spsb1重组慢病毒颗粒;Western blot结果显示shRNA-Spsb1重组慢病毒能够抑制细胞内Spsb1基因表达,证明shRNA-Spsb1的确可以降低肝癌细胞内源性Spsb1基因表达,可用于后期的基因功能研究.结论:成功构建人Spsb1基因的慢病毒shRNA干扰载体LV3-Spsb1并包装出其慢病毒颗粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐国强	贵州医科大学基础医学院	11	12	2.0	3.0
2	孙达权	贵州医科大学基础医学院	15	11	1.0	2.0
3	雷霆雯	贵州医科大学基础医学院	12	4	1.0	1.0
4	李红梅	贵州医科大学基础医学院	9	1	1.0	1.0
5	王筑婷	贵州医科大学基础医学院	6	2	1.0	1.0
6	石松	贵州医科大学基础医学院	6	1	1.0	1.0
7	徐莹莹	贵州医科大学基础医学院	3	0	0.0	0.0
8	莫晓川	贵州医科大学基础医学院	4	1	1.0	1.0