用于筛选shRNA的新型双萤光素酶报告基因载体的构建及应用

• 作者: 刘欣禹 李昂 杜晓 杨安钢 欧阳清 胡志嵩 赵晶 阎博
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 双萤光素酶报告基因 shRNA 载体
• 年，卷（期）: 2017,（21）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 4007-4011
• 页数: 5页
• 分类号: Q75|Q78|Q81
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2017.21.002

摘要

目的:构建一个新型双萤光素酶报告基因载体用于准确高效地筛选有效抑制靶基因表达的shRNA.方法:采用PCR、定向克隆、基因重组等分子生物学方法,将双萤光素酶报告基因系统中需要的报告基因载体、shRNA真核表达载体和内参载体三个功能,整合于一个新型的双萤光素酶报告基因载体pFLuc-C-TK-RLuc-shRNA之中.应用该载体对靶向人PD1基因以及Furin基因的shRNA进行干涉效果比较.结果:应用pFLuc-C-TK-RLuc-shRNA载体进行单质粒转染方法与传统的三质粒转染方法均提示shRNA#1对靶基因PD1的抑制效果最优;但是使用新型双萤光素酶报告基因载体检测结果的标准差数值显著低于传统方法.以pFLuc-C-TK-RLuc-shRNA单质粒转染方法得到的各组样品结果的均一性显著提高,能够准确地反映出shRNA#3较shRNA#2具有更强的Furin基因抑制作用;而传统方法未能有效判断二者的差异.结论:新型双萤光素酶报告基因载体简化了操作步骤,降低了传统三质粒共转染方法所引起的检测结果大幅波动,进一步增强了双萤光素酶报告基因系统的信噪比,提高了筛选抑制靶基因表达shRNA的准确性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵晶	第四军医大学生物化学与分子生物学教研室	44	146	6.0	10.0
2	杨安钢	第四军医大学免疫学教研室	147	801	14.0	21.0
3	欧阳清	第四军医大学免疫学教研室	3	6	2.0	2.0
4	杜晓	第四军医大学生物化学与分子生物学教研室	2	3	1.0	1.0
5	李昂	第四军医大学免疫学教研室	5	19	3.0	4.0
6	胡志嵩	第四军医大学生物化学与分子生物学教研室	1	2	1.0	1.0