稳定表达人α-分泌酶adam10基因启动子荧光素酶报告基因细胞系的构建研究

• 作者: 唐颖 朱炳林 胡小童 韩宇
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 去整合素和金属蛋白酶10 启动子 荧光素酶报告载体 高通量药物筛选
• 年，卷（期）: 2017,（28）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3947-3949,3952
• 页数: 4页
• 分类号: Q291
• 字数: 3097字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2017.28.020

摘要

目的 构建携带adam10基因启动子的荧光素酶报告载体,筛选稳定表达细胞系并分析其活性.方法 提取人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)基因组DNA,以其为模板,PCR扩增adam10基因启动子并克隆至荧光素酶报告载体pGL4.17中,构建adam10基因启动子荧光素酶报告载体pGL4.17-adam10,将其转染SH-SY5Y细胞(无启动子的pGL4.17载体作阴性对照,带有CMV启动子的pGL4.51载体作阳性对照),经G418进行稳定表达株的筛选,用1μmol/L维甲酸处理细胞4d后检测其荧光活性.结果 成功扩增到438 bp的adam10基因启动子,pGL4.17-adam10经PCR和双酶切鉴定均正确.SH-SY5Y细胞被该载体转染后经G418筛选得到稳定表达adam10基因启动子的细胞株,经检测具有较强的转录活性;1μmol/L雏甲酸能诱导adam10基因启动子高效表达.结论 成功构建了人adam10基因启动子荧光素酶报告载体,adam10基因启动子在SH-SY5Y细胞中能稳定表达,为深入研究adam10基因的表达调控、多态性分析及其高通量药物筛选提供基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩宇	重庆医科大学附属第一医院神经内科	10	33	3.0	5.0
2	唐颖	重庆医科大学附属第一医院神经内科	3	6	1.0	2.0
3	胡小童	重庆医科大学附属第一医院神经内科	1	0	0.0	0.0
4	朱炳林	重庆医科大学附属第一医院神经内科	2	0	0.0	0.0