藏猪IFN-λ3成熟肽基因克隆及原核表达、抗病毒效价测定

• 作者: 张继宗 徐志文 朱玲 李原野 杨晓宇 殷玥 王佳煜 陈瑛琪
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 藏猪 IFN-λ3 克隆 原核表达 抗病毒
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 62-69
• 页数: 8页
• 分类号: S828
• 字数: 4580字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9369.2018.10.008

摘要

为探究藏猪Ⅲ型干扰素抗病毒作用,以藏猪肠道和肺脏核酸为模板,采用RT-PCR扩增克隆IFN-λ3基因(ZPoIFN-λ3),经测序鉴定后构建原核表达载体pET-32a(+)-mZPoIFN-λ3,并于大肠杆菌BL21(DE3)中表达.通过优化诱导时间、IPTG浓度,利用镍柱亲和层析纯化表达蛋白,并采用SDS-PAGE验证.纯化蛋白经透析复性浓缩,以此为免疫原制备鼠抗ZPoIFN-λ3多克隆抗体,采用Western Blot鉴定.通过细胞病变抑制法测定表达蛋白在MDBK/VSV系统的抗病毒活性.结果表明,成功克隆藏猪IFN-λ3成熟肽基因,经分析发现藏猪IFN-λ3核酸序列与野猪核酸同源性为100％.成功构建藏猪IFN-λ3原核重组表达质粒,并成功表达大小为34 ku蛋白,蛋白纯化后SDS-PAGE显示为单一条带,Western Blot鉴定结果显示鼠抗ZPoIFN-λ3多克隆抗体具有良好免疫原性.pET-32a(+)-mPoIFN-λ3表达蛋白在MDBK/VSV系统抗病毒效价为10×24.5U·0.1 mL-1,比活力为2×103 U·mg-1.研究首次克隆藏猪IFN-λ3基因并原核表达,通过研究其抗病毒作用,为进一步研究藏猪IFN-λ3生物学特性和相关基因重组药物生物学功能奠定基础,为临床新药物研发提供新方向.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱玲	四川农业大学动物医学院	151	499	13.0	17.0
5	杨晓宇	四川农业大学动物医学院	13	5	1.0	2.0
6	张继宗	四川农业大学动物医学院	4	1	1.0	1.0
7	殷玥	四川农业大学动物医学院	5	9	1.0	3.0
8	陈瑛琪	四川农业大学动物医学院	4	2	1.0	1.0
9	王佳煜	四川农业大学动物医学院	2	0	0.0	0.0
10	李原野	四川农业大学动物医学院	2	0	0.0	0.0