嗜热地衣芽胞杆菌Y6角蛋白酶的异源表达与表征

• 作者: 刘建新 刘艳海 姚大伟 杨德吉
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 地衣芽胞杆菌 角蛋白酶 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 302-310
• 页数: 9页
• 分类号: S188|Q815
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.02.013

摘要

嗜热角蛋白酶可在较高的温度下降解角蛋白,具有良好的热稳定性.为了克隆嗜热地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)Y6角蛋白酶基因,研究重组角蛋白酶酶学特性,本实验根据角蛋白酶基因设计引物,克隆了一个含完整开放性阅读框的l 140 bp基因片段(GenBank No.MF327392),将该片段插入到表达载体pET-32a,转化至大肠杆菌(Escherichia coli)B L21 (DE3),成功诱导表达出重组角蛋白酶,经Ni-亲和柱纯化后对酶学特性进行测定.结果显示Y6菌株的角蛋白酶前体有1个29个氨基酸残基的信号肽,成熟蛋白的理论相对分子量为27.27 kD,等电点为6.57,属于疏水性稳定蛋白质.以酪蛋白为底物,测得重组角蛋白酶最适反应温度为70℃,最适反应pH为8.5,Vmax为0.149 mmol/(L·min),Km为0.029mmol/L,Kcat为20.1 S-1.乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)、Mn2+、Fe3+对其酶活性有一定的抑制作用,但异丙醇、甘油、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)等有机溶剂对其活性没有影响.该嗜热角蛋白酶具有较大的应用潜力,未来可应用于某些工业生产中.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨德吉	南京农业大学动物医学院	45	165	8.0	10.0
2	姚大伟	南京农业大学动物医学院	44	142	7.0	9.0
3	刘艳海	南京农业大学动物医学院	6	7	2.0	2.0
4	刘建新	南京农业大学动物医学院	3	6	1.0	2.0