CYP7A1基因启动子克隆及萤光素酶报告基因载体构建

• 作者: 张照研 王宇光 高月
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 细胞色素P450 7A1(CYP7A1) 报告基因法 载体构建
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 647-652
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 3223字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2018.05.012

摘要

目的:克隆细胞色素P450 7A1 (CYP7A1)基因启动子,构建以CYP7A1基因启动子为启动序列的双萤光素酶报告基因系统并分析其活性,为研究CYP7A1基因转录调控提供有效筛选工具.方法:采用PCR方法克隆CYP7A1基因启动子序列,连接到pUC57载体中,双酶切后连接至萤光素酶报告质粒pGL3-Basic上,构建重组萤光素酶报告质粒pGL3-CYP7A1-promoter-luc.结果:重组质粒经双酶切和测序,证实构建正确;pGL3-CYP7A 1-promoter-luc质粒2、3转染HepG2细胞均具有显著性启动子活性,pGL3-CYP7A 1-promoter-luc2转染24和48 h后经检测分别为对照组(pGL3-basic空载体)的13.1±2.8倍(P＜0.001)和23.3±2.9倍(P＜0.001);pGL3-CYP7A 1-promoter-luc3转染24、48 h后,荧光响应值分别是对照组的8.4±1.6倍(P＜0.001)和22.1±1.9倍(P＜0.01),呈现强启动子活性.结论:构建了CYP7A1基因启动子萤光素酶报告基因重组质粒pGL3-CYP7A 1-promoter-luc,为后续深入研究药物对其调控作用机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高月	北京工业大学生命科学与生物工程学院	8	21	1.0	4.0
3	张照研	北京工业大学生命科学与生物工程学院	3	0	0.0	0.0
7	王宇光	军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所	4	1	1.0	1.0