恒河猴MyD88基因沉默siRNA腺病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 刘锋 焦剑 胡明道 许晔凯 赵方 陈鹏 黄明
• 来源期刊: 西部医学
• 学科: 医学
• 关键词: 恒河猴 MyD88 siRNA 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 943-947
• 页数: 5页
• 分类号: R329.1+5
• 字数: 4019字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3511.2018.07.002

摘要

目的 构建恒河猴MyD88基因沉默siRNA腺病毒载体,观察MyD88siRNA对树突状细胞中MyD88蛋白表达的影响.方法 将合成的MyD88RNAi片段与质粒载体连接,转化进化学感受态的大肠杆菌,然后进行菌落PCR鉴定、阳性克隆测序及质粒的抽提;然后转染HEK293细胞,将获得的重组腺病毒进行两轮扩增后进行纯化;用终点稀释法测定腺病毒滴度;Western blot检测MyD88siRNA对树突状细胞中MyD88蛋白表达的作用.结果 阳性克隆PCR鉴定与理论条带一致,测序鉴定通过,腺病毒载体转染树突状细胞,Western blot检测显示干扰组MyD88蛋白表达降低.结论 成功构建恒河猴MyD88基因沉默siRNA腺病毒载体,MyD88siRNA对恒河猴树突状细胞中的MyD88蛋白表达具有抑制作用.