独行菜LaF3H基因克隆、序列分析及原核表达

• 作者: 冯卫生 匡海学 张金燕 赵乐 郑晓珂 马利刚
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 独行菜 黄烷酮-3-羟化酶 基因克隆 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2018,（23）
• 页码范围: 5626-5632
• 页数: 7页
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2018.23.023

摘要

目的 为了研究独行菜黄酮类化合物生物合成途径的关键基因,从独行菜中克隆了黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H)基因,命名为LaF3H,并进行序列分析、原核表达和纯化.方法 根据独行菜转录组数据中LaF3H 基因序列设计特异性引物,克隆LaF3H 基因的cDNA 序列,构建pET-32a-LaF3H 原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达LaF3H 重组蛋白.结果 LaF3H 基因开放阅读框(ORF)长1 080 bp,编码359个氨基酸,其蛋白质相对分子质量为40 320.序列分析结果表明LaF3H 具有F3H 蛋白的5个保守基序,系统进化分析结果显示LaF3H 蛋白与拟南芥等十字花科植物F3H 蛋白同源性较高.通过构建原核表达载体pET-32a-LaF3H,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达LaF3H 重组蛋白,利用Ni2+亲和色谱得到了纯化的LaF3H 重组蛋白.结论 克隆了LaF3H 基因,获得LaF3H 纯化蛋白,为下一步制备LaF3H 蛋白抗体、酶学活性检测,研究LaF3H 基因在独行菜黄酮类化合物生物合成途径中的功能奠定基础.