米曲霉来源α-半乳糖苷酶基因gal A在毕赤酵母中的 表达及其对豆浆中大豆寡糖的酶解效果

• 作者: 曹云鹤 杨勇智 王剑 郭昱含 郭贺楠
• 来源期刊: 动物营养学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 米曲霉 α-半乳糖苷酶 密码子优化 毕赤酵母 大豆寡糖
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 分子营养
• 页码范围: 4569-4579
• 页数: 11页
• 分类号: Q786
• 字数: 8270字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2018.11.033

摘要

本试验旨在研究米曲霉来源α-半乳糖苷酶基因gal A在毕赤酵母中的表达及其对豆浆中大豆寡糖的酶解效果.以NCBI数据库中米曲霉来源α-半乳糖苷酶基因gal A的mRNA序列(GenBank登录号:XP 001817311.1)为依据,利用PCR扩增得到gal A基因并根据毕赤酵母使用密码子的偏好性优化基因序列,构建野生型和优化型毕赤酵母工程菌株,摇瓶发酵120 h,测定酶学性质.设置25和45℃2个温度,每个温度下各设置0.6、1.2和2.4 U 3个加酶量,用发酵得到的α-半乳糖苷酶酶解10 mL豆浆中的大豆寡糖.结果显示:该α-半乳糖苷酶基因gal A全长1605 bp,不含内含子,编码534个氨基酸,诱导120 h后优化型工程菌株的α-半乳糖苷酶活性为1.952 U/mL,比野生型工程菌株提高了285％.发酵得到的α-半乳糖苷酶的最适pH为4.33,最适温度为55℃;在pH 3.00～8.00间稳定性良好,在55℃条件下保持40 min后残余α-半乳糖苷酶相对活性为60％;该酶对大部分金属离子具有抗性,但其被MnSO4抑制;以对硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷(pNPG)为底物时的酶动力学参数米氏常数(Km)为0.0243 mol/L,最大反应速度(Vmax)为1.0×10-7 mol/(L·s).酶解试验结果显示,45℃下加酶量为2.4 U反应12 h后,大豆寡糖中棉籽糖的降解率为50.0％,水苏糖的降解率为31.9％.由此可见,本试验中生产的α-半乳糖苷酶对豆浆中的大豆寡糖有一定的降解作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹云鹤	中国农业大学动物科学技术学院动物营养学国家重点实验室	16	89	6.0	9.0
2	王剑	中国农业大学动物科学技术学院动物营养学国家重点实验室	55	339	9.0	16.0
3	郭昱含	中国农业大学动物科学技术学院动物营养学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0
4	杨勇智	中国农业大学动物科学技术学院动物营养学国家重点实验室	3	5	1.0	2.0
5	郭贺楠	中国农业大学动物科学技术学院动物营养学国家重点实验室	2	0	0.0	0.0