低温、嗜盐α-淀粉酶Amy3的克隆、表达及重组酶性质

• 作者: 房伟 方泽民 王梅 肖亚中 薛毅
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: α-淀粉酶 低温催化 嗜盐
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 336-345
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20170170

摘要

[目的]从分离自北极海底沉积物Pseudoalteromonas sp.K8菌株克隆、重组表达α-淀粉酶Amy3,并研究其酶学性质.[方法]基于Pseudoalteromonas haloplanktis TAC 125基因组分析,从亲缘关系较近的Pseudoalteromonas sp.K8克隆获得α-淀粉酶基因amy3,以大肠杆菌为宿主进行重组表达,经Ni-NTA亲和层析柱纯化获得重组蛋白Amy3.以可溶性淀粉等为底物,研究Amy3的酶学性质.[结果]Amy3最适催化pH为8.5,在pH 6.5-10.0范围内酶活力维持在40％以上;其在pH 7.5-8.5范围的稳定性较好,pH 8.0条件下的半衰期可达4h.Amy3在低温下较稳定,25℃半衰期为5h;最适反应温度为25℃,并且在0℃可以保持50％以上酶活力,显示良好的低温催化特性.NaCl能够有效提升Amy3的酶活力及稳定性;荧光光谱分析表明,NaC1并未引起Amy3酶蛋白三级结构的改变.动力学分析显示,NaC1影响了酶催化的Km及Kcat,进而提升了酶的催化效率.底物特异性分析表明,Amy3对支链淀粉的水解能力优于直链淀粉,并能够有效地水解小麦淀粉、玉米淀粉和木薯淀粉.[结论]来源于Pseudoalteromonassp.K8菌株的α-淀粉酶Amy3具有良好的低温催化及嗜盐性,在洗涤、食品、污水处理等行业中有潜在的应用前景.