人源化抗Siglec-9抗体Fab片段的制备及鉴定

• 作者: 尤娜 张馨 朱进 杨志国 汪茂荣 褚萨萨
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Siglec-9 Fab片段 抗Siglec-9抗体 THP-1细胞 炎性细胞因子
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 877-881
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 3606字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2018.06.015

摘要

目的:构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达质粒,表达、纯化此抗体以及特性分析,并初步探讨此抗体的生物学功能.方法:利用聚合酶链式反应(PCR)分别获得抗体轻链和重链的可变区及恒定区,经重叠延伸PCR连接,酶切后与原核表达载体pETDUET-1重组,转入表达感受态Escherichia coli BL21 中,通过蛋白纯化系统AKTA和His-trap Lambda Fab纯化.使用SDS-PAGE、ELISA以及Western blot鉴定和分析.采用实时荧光定量PCR初步检测抗Siglec-9抗体Fab段对炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8的mRNA表达量的影响.结果:成功获得抗体轻链和重链,构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达系统,经 SDS-PAGE、Western blot、ELISA 检测证实抗 Siglec-9 抗体 Fab 段与 Siglec-9 抗原特异性结合.抗Siglec-9抗体Fab段可抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8的mRNA表达量.结论:人源化抗Siglec-9抗体Fab段进行了原核系统表达、纯化和鉴定,并初步验证可抑制炎性细胞因子的mRNA表达量,为进一步研究该抗体的生物学特性及应用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱进		66	357	9.0	16.0
2	褚萨萨		3	0	0.0	0.0
3	尤娜		2	0	0.0	0.0
4	张馨		4	4	1.0	1.0
5	杨志国		1	0	0.0	0.0
6	汪茂荣		10	25	2.0	5.0