构建高效糖配体再生重组菌生物催化合成莱鲍迪苷D

• 作者: 王勇 费理文
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 哲学
• 关键词: 甜菊糖苷 莱鲍迪苷D 尿苷二磷酸葡萄糖 蔗糖合酶 UDP-糖基转移酶 生物催化
• 年，卷（期）: 2018,（22）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 116-122
• 页数: 7页
• 分类号: Q815|A
• 字数: 5451字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201822018

摘要

利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose,UDPG)再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化.从拟南芥cDNA克隆获得AtSUS3基因,将其装配至pET28a获得表达质粒pLW105,随后pLW105与携带糖基转移酶EUGT11基因的质粒共转化大肠杆菌BL21 (DE3)构建双酶共表达工程菌.在不添加UDPG或者尿核苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)的条件下,以上述双酶共表达工程菌全细胞催化莱鲍迪苷A(RA)获得的底物摩尔转化率大于80％,RD产量达到930 mg/L.随后构建双酶基因串连质粒pLW108及双酶共表达大肠杆菌BL21 (DE3)工程菌.用串连质粒构建的工程菌催化效果与双质粒共转化相同.采用共表达双酶工程菌的发酵破碎粗酶进行催化,结果显示以粗酶催化可简化催化体系,并可将细胞催化体系所需高质量浓度蔗糖用量降至质量浓度5 g/100 mL,同时在不添加外源UDPG的条件下实现RD的高效生物催化,RA底物摩尔转化率达到93％,RD产量约为1 051 mg/L.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王勇	中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所	507	5142	33.0	48.0
2	费理文		2	2	1.0	1.0