可溶型小鼠细胞因子LIGHT/TNFSF14的原核表达、纯化及活性验证

• 作者: 刘庆亚 刘飞 寇艳波 颜晓庆
• 来源期刊: 中国医学创新
• 关键词: LIGHT 肿瘤坏死因子 异源表达纯化 亲和纯化
• 年，卷（期）: 2018,（32）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 27-31
• 页数: 5页
• 字数: 3851字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-4985.2018.32.007

摘要

目的:前期研究发现小鼠细胞因子LIGHT(TNFSF14)能够抑制脂肪前体细胞分化,表达纯化LIGHT并验证其活性,将为进一步明确其调控脂肪前体细胞分化的机制提供坚实的基础.方法:以小鼠脾脏总cDNA为模板,通过PCR扩增得到LIGHT胞外段编码序列,并将其克隆至pGEX4T-1,经菌液PCR、限制性内切酶酶切及测序验证后获得重组质粒pGEX4T-1-LIGHTc.重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导蛋白表达后SDS-PAGE检测菌体破碎液上清中可溶型LIGHTc的存在.含有重组蛋白的上清经亲和纯化后获得GST-LIGHTc重组蛋白,重组蛋白经凝血酶消化后得到游离型LIGHTc单体,最后通过结肠癌细胞生长抑制实验验证LIGHTc单体的活性.结果:通过大肠杆菌异源表达和亲和纯化获得了GST-LIGHTc重组蛋白,经凝血酶处理后得到有活性的游离型小鼠LIGHT蛋白.结论:通过大肠杆菌异源表达及亲和纯化获得有活性的小鼠LIGHTc重组蛋白,为进一步研究LIGHT影响脂肪前体细胞分化的分子机制奠定了重要的材料基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	寇艳波		10	8	1.0	2.0
2	颜晓庆		11	3	1.0	1.0
3	刘庆亚		6	2	1.0	1.0
4	刘飞		2	3	1.0	1.0