IL35慢病毒质粒的提取

• 作者: 刘潺潺 李婷
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: pLVX-IRES-ZsGreen1-mus-IL35 慢病毒 PCR 质粒
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 35-38
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.01.0007

摘要

[目的]构建可以大规模提取IL35的新型质粒pLVX-IRES-ZsGreen1-mus-IL35.[方法]质粒pLVX-IRES-ZsGreen1和pUC57-mus-IL35-拼接用XhoⅠ和NotⅠ进行双酶切,将回收纯化的目的片段mus-IL35-拼接(NotⅠ/XhoⅠ)与回收纯化的载体pLVX-IRES-ZsGreen1(NotⅠ/XhoⅠ)连接,连接产物命名为pLVX-IRES-ZsGreen1-mus-IL35-拼接.连接产物转化DH5α感受态细胞,涂布LB Amp平板,37℃温箱培养过夜.[结果]检测慢病毒pLVX-IL35滴度为:6×107TU/ml,提取质粒浓度为1～2 mg/ml.鉴定引物为测序的通用引物,上游引物和下游引物离MCS区域加上目的序列,目的PCR条带大约1600 bp,送鉴定正确菌液测序.测序结果比对正确.[结论]采用新型超量无内毒素质粒提试剂盒,可以大规模方便快速提取相关质粒.