牛妊娠相关糖蛋白9(bPAG9)的真核表达及纯化

• 作者: 刘长彬 卢春霞 石国庆
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛妊娠相关糖蛋白 重组蛋白 真核表达
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 土壤肥料·微生物·植物保护·畜牧兽医·信息技术
• 页码范围: 1552-1559
• 页数: 8页
• 分类号: Q816|S823
• 字数: 5633字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2019.08.021

摘要

[目的]构建proEM-bPAG9重组表达载体,并在HEK293细胞中转染表达.为进一步抗体的制备和奶牛早孕诊断技术的研究奠定基础.[方法]通过基因优化和PCR法扩增得到bPAG9全基因序列,经双酶切法将bPAG9基因插入到表达载体proEM中,构建proEM-bPAG9重组载体后转到DH5α感受态细胞中,重组质粒转染至哺乳动物细胞HEK293中进行瞬时表达,再通过亲和层析纯化bPAG9重组蛋白(rbPAG9),经SDS-PAGE和Western Blot检测rbPAG的表达效果.[结果]通过全基因合成法得到1 182 bp的bPAG9基因片段,构建的重组质粒proEM-bPAG9经双酶切获得约4 369 bp和1 176 bp的两条片段,与预期值相符;对重组载体测序,与优化后的基因序列完全一致,氨基酸未发生突变;SDS-PAGE和Western Blot鉴定显示,获得相对分子质量约为68 kDa的bPAG9重组蛋白,通过Ni2+亲和层析纯化后,rbPAG9纯度可达90％.[结论]通过基因优化及真核表达获得分子质量为68 kDa的rbPAG9重组蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢春霞	长江师范学院现代农业与生物工程学院	8	0	0.0	0.0