Pfu DNA聚合酶在大肠杆菌Rosetta(DE3)中的表达及快速纯化

• 作者: 何华华 喻婵 王婷 胡晓韵
• 来源期刊: 湖北大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: Pfu DNA聚合酶 Rosetta(DE3) 亲和层析 PCR检测
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 酶的催化与转化研究专栏
• 页码范围: 223-227
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3959字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2375.2019.03.002

摘要

来源于Pyrococcus furiosus COM1菌的Pfu DNA聚合酶具有保真性高、延伸速度快、热稳定性强等特点,能够提高PCR反应过程中的扩增效率,减少错误碱基掺入率.以大肠杆菌Rosetta(DE3)为重组细胞,利用一种快速表达纯化方法,让Pfu DNA聚合酶的表达纯化过程变得更加简便,并维持其高活性.结果表明,Pfu DNA聚合酶在大肠杆菌Rosetta(DE3)中能够进行大量表达,同时60℃高温水浴能有效去除杂蛋白,简化纯化步骤及提高Pfu DNA聚合酶纯度.经过一系列纯化步骤处理后.Pfu DNA聚合酶仍然能够保持较好的酶活,且在100 μL PCR反应体系中,加入4μL的1 mg/mLPfu DNA聚合酶液效果最佳.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王婷	湖北大学生命科学学院生物资源绿色转化协同创新中心	12	78	5.0	8.0
2	胡晓韵	湖北大学生命科学学院生物资源绿色转化协同创新中心	2	0	0.0	0.0
3	何华华	湖北大学生命科学学院生物资源绿色转化协同创新中心	2	0	0.0	0.0
4	喻婵	湖北大学生命科学学院生物资源绿色转化协同创新中心	2	0	0.0	0.0