平原型和田羊毛囊KAP4.2基因的克隆与原核表达

• 作者: 吴庭辉 李树伟 李涛
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 平原型和田羊 角蛋白关联蛋白 KAP4.2基因 毛囊 原核表达 半粗羊毛
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 11-15,20
• 页数: 6页
• 分类号: S826.9|Q785
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.10.0465

摘要

为了探索影响平原型和田羊羊毛品质的角蛋白关联蛋白(keratin association protein,KAP)4.2基因的结构与功能,试验以平原型和田羊毛囊总RNA反转录得到的cDNA为模板,经RT-PCR扩增KAP4.2基因成熟蛋白序列,与pMD18-T载体连接,经PCR扩增、双酶切鉴定连接正确后再与原核表达载体pET-28a连接,连接正确后对其测序并进行同源性分析及氨基酸分析.结果 表明:平原型和田羊重组质粒pMD-18T-KAP4.2构建成功,表达质粒pET-28a-KAP4.2成功原核表达.在不同诱导时间KAP4.2基因表达蛋白的量明显不同,在诱导4小时时蛋白表达量最大;不同体积IPTG诱导后KAP4.2基因表达蛋白的量明显不同,体积为10 μL时蛋白表达量最大.平原型和田羊毛囊KAP4.2基因序列与GenBank中美利奴羊(X05639.1)基因序列同源性为99.1％,显示有3处发生突变,分别为第77位的T突变为C,第108位的G突变为T,第200位的C突变为T.平原型和田羊KAP4.2蛋白基因第26位氨基酸由亮氨酸突变为脯氨酸,第67位氨基酸由脯氨酸突变为亮氨酸.说明平原型和田羊毛囊KAP4.2基因序列与GenBank中美利奴羊基因序列同源性较高,虽然高度保守,但存在碱基突变和氨基的变异.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李树伟		23	50	4.0	7.0
2	李涛		5	7	1.0	2.0
3	吴庭辉		1	0	0.0	0.0