甲基-CpG结合结构域蛋白2抑制PRRSV复制的研究

• 作者: 史西保 常晓博 张改平 李青梅 王丽 范小敏 赵慧君 赵旭阳 邓瑞广 陈静
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 甲基-CpG结合结构域蛋白2 miR-373
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 903-911,917
• 页数: 10页
• 分类号: S855
• 字数: 6403字
• 语种: 中文

摘要

为了研究甲基-CpG结合结构域蛋白2(MBD2)在体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的复制是否有抑制作用.首先,构建MBD2的3'-UTR报告质粒,通过双荧光素酶报告结果表明MBD2是miR-373靶基因.然后用MOI=1的PRRSV感染MARC-145细胞,在24、36、48 h后分别取样,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blots试验进行检测.结果表明,PRRSV感染下调MBD2的mRNA和蛋白的表达水平.用真核表达载体pcDNA3.1-Flag构建了MBD2的真核表达质粒pcDNA3.1-Flag-MBD2,用pcDNA3.1-Flag-MBD2转染MARC-145细胞,24 h后感染PRRSV,48 h后收获细胞.TCID50的试验结果表明,过表达MBD2能降低PRRSV滴度,而qRT-PCR和Western blots的结果则表明MBD2能降低PRRSV的载量;相反,MBD2的siRNA试验表明,下调表达有利于PRRSV在MARC-145细胞复制.通过基因缺失试验,构建MBD2部分结构域缺失的表达质粒,最终发现MBD2的GR与MBD结构域可能在MBD2抑制PRRSV复制起关键的作用.研究结果表明,MBD2是拮抗PRRSV的宿主内源性蛋白,并发现MBD2的GR与MBD结构域可能在MBD2抑制PRRSV复制中起关键的作用,而PRRSV可能利用miR-373来下调MBD2的表达,从而逃逸宿主对病毒的清除.