恶性疟原虫自噬相关蛋白8基因原核重组表达及多克隆抗体制备

• 作者: 李晶晶 李缜 谷俊朝 贾永根 邹洋 闫爱霞 黄敏君
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 恶性疟原虫 自噬相关蛋白8 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 411-415,429
• 页数: 6页
• 分类号: R531.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13604/j.cnki.46-1064/r.2019.05.02

摘要

目的 通过pET-41 Ek/LIC载体在大肠杆菌工程菌中重组表达恶性疟原虫自噬相关蛋白8(PfAtg8)基因的重组蛋白GST-PfAtg8-6× His,并用蛋白免疫法制备小鼠抗自噬相关蛋白8(PfAtg8)的多克隆抗体,并验证其效价.方法 体外培养恶性疟原虫3D7株,并提取DNA,PCR扩增PfAtg8序列全长,与pET-41 Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠杆菌RosettaTM(DE3) PLysS工程菌中诱导表达重组蛋白GST-PfAtg8-6×His,蛋白免疫法制备鼠抗PfAtg8的多克隆抗体并用Western blots和酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)进行效价验证.结果 PCR扩增PfAtg8基因并插入pET-41 Ek/LIC载体,转化入大肠杆菌.诱导表达并纯化重组蛋白,进而利用该蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,经验证该抗体可对重组蛋白进行特异性识别,且效价可达1:100000.结论 成功表达、纯化了GST-PfAtg8-6×His重组蛋白,并免疫小鼠获得多克隆抗体血清.