猪ASC及Ub基因的克隆及真核表达重组质粒的构建

• 作者: 华思红 孙永科 杨玉艾 樊钰莹 王志鹏
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 凋亡相关点状样蛋白 泛素 真核表达 泛素化
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 7-11
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6|Q789
• 字数: 4140字
• 语种: 中文

摘要

炎症小体不仅参与机体的天然免疫反应, 同时还参与机体抗病毒等多种宿主防御反应.在多种疾病相关信号通路反应中都伴随着蛋白质的泛素化修饰.NOD样受体 (NLRs) 介导的炎症小体信号通路中, 凋亡相关点状样蛋白 (ASC) 是关键的接头蛋白.为了解猪瘟病毒 (CSFV) 感染对ASC泛素化水平的影响, 通过RT-PCR从猪血管内皮细胞 (ECs) 中扩增获得ASC和泛素 (Ub) 的全长cDNA双链片段, 连接至克隆载体pMD-18T, 获得重组克隆质粒pMD-ASC和pMD-Ub.双酶切pMD-ASC获得ASC目的序列, 连接至pcDNA3.1-Flag, 双酶切pMD-Ub获得Ub目的序列, 连接至pcDNA3.0-HA, 获得重组表达质粒pcDNA3.1-Flag-ASC和pcDNA3.0-HA-Ub.将pcDNA3.1-Flag-ASC和pcDNA3.0-HA-Ub转染ECs, Western blot在蛋白水平检测ASC和Ub的表达.结果表明, 成功构建了带有Flag标签的ASC真核表达质粒和带有HA标签的Ub真核表达质粒, 且在ECs中获得高效表达, 为进一步体外研究CSFV调控猪血管内皮细胞ASC泛素化的机制提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨玉艾	云南农业大学动物医学院	44	195	8.0	12.0
2	孙永科	云南农业大学动物医学院	34	142	7.0	10.0
3	华思红	云南农业大学动物医学院	3	6	1.0	2.0
4	樊钰莹	云南农业大学动物医学院	3	6	1.0	2.0
5	王志鹏	云南农业大学动物医学院	2	1	1.0	1.0