猪Nrf2基因克隆、生物信息学分析及启动子区转录活性分析

• 作者: 刘宗立 崔景香 曾勇庆 李川皓 杨丹丹 陈伟 陈涛
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 Nrf2基因 基因克隆 启动子 双荧光素酶
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 1328-1339
• 页数: 12页
• 分类号: S828.2
• 字数: 7477字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2019.07.002

摘要

旨在了解猪Nrf2基因的结构和功能,研究Nrf2基因的转录调控机制.本研究选取6头90 kg左右的健康大蒲莲猪为试验动物,采用eDNA末端快速克隆技术(RACE)和染色体步移技术获得大蒲莲猪Nrf2基因完整的cDNA序列和启动子区域,利用生物信息学软件分析Nrf2基因及其启动子区域的生物学特征.结果,Nrf2基因cDNA全长2 358 bp,包括87 bp的5'UTR,495 bp的3'UTR序列,CDS区大小为1 776 bp,编码591个氨基酸.对预测蛋白质序列进行生物信息学分析,蛋白分子量为66.402 7 ku,理论等电点(pI)为4.66,大部分二级结构为α-螺旋.采用染色体步移技术扩增得到5'侧翼序列2 091 bp的片段.Nrf2基因5'侧翼区经预测含有典型的TATA-box,不含CpG岛.构建不同长度启动子片段的pGL3-Basic表达载体,转染293T细胞后经双荧光素酶活性检测,提示在-903～-710 bp区域内可能存在正调控区或增强子,生物信息学预测其中含有多个转录因子结合位点,可能参与Nrf2基因转录调控.本研究成功获得了Nrf2基因完整的cDNA序列和启动子区域,并且发现-903～-710 bp为核心启动子,本研究为猪抗氧化应激的遗传改良提供一定理论基础.