重组RPLP0蛋白的表达、鉴定及评价

• 作者: 刘剑平 卢小岚 张国元 杜琴 梁骑 王东生 王强 王舒琪 罗文依
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RPLP0 重组质粒 重组蛋白 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2019,（15）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1857-1861
• 页数: 5页
• 分类号: R392.9
• 字数: 3985字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2019.15.012

摘要

目的:构建重组RPLP0蛋白的原核表达载体并诱导表达,对表达产物进行纯化鉴定及评价.方法:设计重组RPLP0蛋白基因,经PCR扩增获得目的基因;在其5′和3′端引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点,构建pET41a-GST-RPLP0-6?His融合基因表达载体;对该质粒载体进行酶切鉴定和测序验证,将鉴定正确的重组质粒载体转化至大肠杆菌并以IPTG诱导表达;经过尿素溶液纯化及复性以后得到复性的重组RPLP0蛋白;采用Western blot分析重组RPLP0蛋白的免疫原性;采用ELISA法对其抗体结合性、特异性进行分析.结果:酶切及测序结果显示,本实验成功克隆出重组RPLP0蛋白基因,将获得的目的基因构建至原核表达载体pET41a,经IPTG诱导后成功表达目的蛋白.SDS-PAGE电泳结果显示重组RPLP0蛋白为包涵体表达蛋白,分子量约为61 kD.Western blot检测显示重组RPLP0蛋白具有完全的免疫原性;ELISA检测显示重组RPLP0蛋白具有良好的抗体结合性和特异性.结论:表达、鉴定并分析了重组RPLP0蛋白,为深入研究RPLP0蛋白的功能及应用奠定基础.