重组SSB蛋白表达、鉴定及评价

• 作者: 刘剑平 卢小岚 姚丽华 张国元 杜琴 汪光蓉 王东生 王强 王舒琪 罗文依
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: SSB 重组质粒 蛋白表达 蛋白鉴定
• 年，卷（期）: 2019,（14）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2438-2442
• 页数: 5页
• 分类号: R446.6
• 字数: 3935字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2019.14.024

摘要

目的 构建SSB蛋白原核表达质粒,在大肠埃希菌中诱导表达后进行纯化.方法 以Hela细胞提取RNA后逆转录的cDNA为模板,利用聚合酶链反应(PCR)扩增出带酶切位点BamH Ⅰ和Xho Ⅰ的人SSB蛋白基因序列,经酶切后插入PET41a质粒中,构建成GST-SSB-6*His-pet41a重组表达质粒,转化入感受态大肠埃希菌OverExpress C41 (DE3)中,经异丙基pn半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用C端的His标签(Histag)进行Ni-树脂柱亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定重组蛋白表达形式,蛋白印迹法(WB)鉴定重组蛋白的免疫原性,酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其免疫反应性和特异性.结果 PCR扩增获得目的基因,菌落PCR示重组表达质粒构建成功,转化感受态OverExpress C41 (DE3)后经诱导有高效表达,SDS-PAGE显示GST-SSB-6*His重组蛋白为上清可溶性表达,WB示重组蛋白有足够的免疫原性,能与外周血中的抗SSB抗体发生特异性反应,特异性达100％.结论 成功构建了GST-SSB-6*His-PET41a重组表达质粒,经诱导表达后可纯化出目的蛋白,为进一步建立应用于国产仪器的全自动定量检测抗SSB自身抗体的磁微粒化学发光试剂,奠定了基础.