真核重组质粒pCDNA3.1-Flag-PTEN和原核重组质粒pGEX-6 P-1-GST-PTEN构建

• 作者: 于明 朱颖 柴云
• 来源期刊: 蚌埠医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 抑癌蛋白 人第10号染色体缺失的磷酸酶 真核 原核 克隆构建 重组表达
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1437-1440
• 页数: 4页
• 分类号: R392.13
• 字数: 3767字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2019.11.001

摘要

目的:构建人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)真核重组质粒pCDNA3.1-Flag-PTEN和原核重组质粒pGEX-6P-1-GST-PTEN,研究PTEN融合质粒生物学效应.方法:根据基因库中PTEN序列,设计并合成相关引物.用基因重组技术将目的片段插入pCDNA3.1-Flag和pGEX-6P-1-GST空载质粒中,通过PCR和DNA测序,鉴定插入基因序列.将pCDNA3.1-Flag-PTEN转染到HEK 293细胞,将pGEX-6P-1-GST-PTEN转到E.coli BL-21中,通过Western blotting和考马斯亮蓝染色法分别检测PTEN蛋白的表达.结果:PCR显示目的基因插入成功;DNA测序显示插入序列与目的基因序列完全一致,无位点突变;Western blotting和考马斯亮蓝染色法证实融合质粒可以在生物体内正确表达.结论:成功构建PTEN相关真核和原核融合质粒并正确表达,为PTEN在帕金森疾病中的机制研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱颖	江苏大学附属医院神经内科	29	178	9.0	12.0
2	于明	江苏大学附属医院神经内科	83	407	9.0	15.0
3	柴云	江苏大学附属医院神经内科	1	0	0.0	0.0