猪脑心肌炎病毒VR-129 B株VP2重组蛋白的构建表达及其免疫活性分析

• 作者: 万华印 吴云 吴庆荣 张俊辉 李健 李茹冰 赵月 陈柯君
• 来源期刊: 科学技术与工程
• 学科: 农学
• 关键词: 脑心肌炎病毒 重组质粒pDC315-EMCV-VP2 转染 Q-PCR 免疫活性
• 年，卷（期）: 2019,（34）
• 所属期刊栏目: 农业科学
• 页码范围: 116-122
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4980字
• 语种: 中文

摘要

为获得大量猪脑心肌炎VP2 基因及蛋白研究的细胞模型,构建pDC315-EMCV-VP2 真核表达载体,且将其转染到293T细胞,筛选出阳性质粒进行克隆. EMCV VR-129B株VP2基因序列参照GenBank(登录号:X74312),利用RT—PCR方法扩增VP2的全基因序列,将其与质粒pDC315经NheI和XhoI双酶切后连接,构建pDC315-EMCV-VP2重组表达质粒,并将其转染至293T细胞.使用荧光定量PCR方法观察pDC315-EMCV-VP2真核表达载体在细胞中的表达情况.双酶切PCR结果获得大小为780 bp 的基因片段,测序结果显示与 GenBank 上已经公布的同名基因(登录号:X74312)序列片段同源性为100% ,重组质粒构建成功.实时荧光定量PCR(QPCR)结果显示,重组质粒转染组与空质粒组之间相比,EMCV-VP2基因的表达量显著上调(P<0. 001);在荧光显微镜下观察转染细胞,转染成功部分出现较亮绿色荧光,EMCV-VP2基因表达稳定.从转染细胞中提取重组蛋白与EMCV阳性血清和阴性血清进行ELisa反应,具有较好免疫活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	万华印		10	58	3.0	7.0
2	吴庆荣	广东药科大学药学院	3	1	1.0	1.0
3	吴云	广东药科大学药学院	2	0	0.0	0.0
4	赵月		5	20	2.0	4.0
5	李健	广东药科大学药学院	7	3	1.0	1.0
6	李茹冰		3	2	1.0	1.0
7	陈柯君	中国人民解放军南部战区总医院药剂科	1	0	0.0	0.0
8	张俊辉		2	1	1.0	1.0