稳定表达Cytoglobin的肝细胞株LO-2的建立及生长增殖的变化

• 作者: 刘诗俐 张梓荣 王哲彦 续艳梅 董文其 陈柏洪
• 来源期刊: 暨南大学学报（自然科学与医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: CYGB LO-2 慢病毒重组表达载体 稳定表达 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 页码范围: 70-78
• 页数: 9页
• 分类号: Q291
• 字数: 4691字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11778/j.jdxb.2020.01.009

摘要

目的:建立过表达细胞珠蛋白Cytoglobin(CYGB)的人肝细胞LO-2稳定株,初步探究CYGB对LO-2细胞生长增殖的影响.方法:采用PCR法扩增CYGB编码基因,并通过GATEWAY克隆技术构建慢病毒重组表达载体Plenti-N-GFP-CYGB;酶切、测序鉴定后,与包装质粒三质粒共转人肾上皮细胞(HEK293T),收集、浓缩含病毒上清,获得病毒颗粒;感染LO-2细胞并采用流式细胞分选技术筛选稳定细胞株,Western blot检测表达情况;使用CCK-8试剂盒检测过表达CYGB对LO-2细胞增殖的影响,通过流式细胞技术检测过表达CYGB对LO-2细胞凋亡的影响.结果:慢病毒重组表达载体Plenti-N-GFP-CYGB双酶切鉴定以及基因序列比对鉴定均正确.三质粒共转HEK293T细胞后,荧光显微镜下观察大部分细胞出现绿色荧光;收集病毒颗粒并感染LO-2细胞后,经流式细胞分选技术筛选获得稳定表达CYGB的细胞,Western blot鉴定显示,LO-2稳定株组的CYGB表达条带明显,阴性对照组未出现条带.CCK-8法绘制的细胞生长曲线显示,稳定表达细胞组的细胞生长速率低于阴性对照组,有统计学差异(P<0.01).流式细胞技术检测各组LO-2细胞凋亡情况结果显示,稳定表达细胞组的细胞凋亡百分比高于阴性对照组(P<0.05).结论:成功构建慢病毒重组表达载体Plenti-N-GFP-CYGB;建立稳定表达CYGB的人肝细胞株LO-2-GFP-CYGB以及阴性对照组细胞株LO-2-GFP;稳定表达CYGB的肝细胞生长速率较阴性对照组肝细胞降低,稳定表达CYGB的肝细胞凋亡百分比高于阴性对照组肝细胞;为CYGB与其蛋白的相互关系研究提供了细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董文其	南方医科大学检验与生物技术学院	43	142	6.0	9.0
2	王哲彦	南方医科大学检验与生物技术学院	2	0	0.0	0.0
3	续艳梅	南方医科大学检验与生物技术学院	2	0	0.0	0.0
4	刘诗俐	南方医科大学检验与生物技术学院	2	0	0.0	0.0
5	陈柏洪	中山大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
6	张梓荣	南方医科大学检验与生物技术学院	1	0	0.0	0.0