铜绿假单胞菌黏附素蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备

• 作者: 冯伟 宋静芳 陈芬芳
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 黏附素 重组蛋白 生物信息学
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 129-133,146
• 页数: 6页
• 分类号: Q939.94
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2020.02.0022

摘要

[目的]克隆铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)黏附素(adhesin)基因,表达纯化黏附素蛋白和获得多克隆抗体.[方法]设计特异性PCR引物,以铜绿假单胞菌DNA为模板,PCR法扩增铜绿假单胞菌黏附素基因,并将其进行双酶切后连接到表达载体pET28a,将重组质粒pET28a-adhesin转入大肠杆菌BL21,IPTG诱导目的蛋白表达,然后通过亲和层析进行纯化.再利用各种生物信息学软件分析该蛋白的生物学特性.将adhesin蛋白免疫小鼠,并获得了高浓度的多克隆抗体.[结果]显示成功得到了重组质粒pET28a-adhesin,并通过亲和层析得到重组adhesin蛋白.Adhesin的α-螺旋含量为46.37％,无规卷曲的含量为35.96％,β片层的含量为17.67％.模拟得到了adhesin蛋白的三级结构.该蛋白是一个跨膜蛋白,具有两个跨膜区.Adhesin蛋白具有良好的免疫原性,获得的抗血清效价高于1:5120.[结论]纯化得到了重组adhesin及其抗血清,为研究该蛋白的功能提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯伟		34	152	7.0	10.0
2	陈芬芳		5	19	2.0	4.0
3	宋静芳		2	2	1.0	1.0