风疹病毒蛋白串联亲和纯化质粒的构建及表达纯化

• 作者: 吴瑞 李园园 韩月雯 马超锋
• 来源期刊: 中国病毒病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 风疹病毒 串联亲和纯化 慢病毒载体 蛋白相互作用
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 114-117
• 页数: 4页
• 分类号: R34|R373.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16505/j.2095-0136.2019.0075

摘要

目的 为了研究风疹病毒(rubella virus,RV)蛋白及其相互作用蛋白在宿主细胞中的功能,构建带eXact/6His串联亲和纯化标签的重组RV基因慢病毒表达载体并在293T细胞中表达纯化.方法 从风疹病毒全基因组中克隆获得E1、E2、Capsid、P90及P150基因序列,将基因序列导入含有eXact/6His标签的pCDH-CMV-EF1-Puro慢病毒表达载体中.将构建的pCDH-CMV-eXact/6 His/RV-EF1-Puro表达载体和包装质粒psPAX2、pMD2.G共转染293T细胞后获得慢病毒颗粒,随后感染293T细胞并通过嘌呤霉素进行筛选.串联亲和纯化重组蛋白eXact-6His-RV,并通过6His抗体进行检测.结果 成功构建带eXact/6His串联亲和纯化标签的重组RV蛋白慢病毒表达载体,并实现在293T细胞中的稳定表达及纯化.结论 eXact 6His-RV重组蛋白在293T细胞中的成功表达及纯化,为进一步研究风疹病毒蛋白及其相互作用蛋白在宿主细胞内的功能奠定了实验基础.