单引物PCR法引入定点突变

• 作者: 付远辉 何金生 彭向雷 王丽男 王烨 苏彦斌 郑妍鹏
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 定点突变 单引物 PCR 基因工程
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 19-23
• 页数: 5页
• 分类号: Q291
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.2005033

摘要

目的:利用单个突变引物,在含人呼吸道合胞病毒F蛋白基因编码序列的pcDNA3.1(+)-F质粒中,通过单次环形PCR在特定序列位置引入定点突变.方法:以双链环状的pcDNA3.1(+)-F质粒DNA为模板,设计分别含有三种目的突变N70Q,I431N,Q270T的三条单引物,分别进行单次PCR.用甲基化DNA特异的限制性内切酶DpnI处理PCR产物后转化大肠杆菌DH5α,进行克隆筛选,酶切鉴定和测序分析.结果:酶切鉴定结果和测序结果均符合预期,利用单引物PCR法成功在含人呼吸道合胞病毒F蛋白基因编码序列的pcDNA3.1(+)-F质粒DNA中引入了单碱基突变、两个间隔碱基突变及相邻三碱基突变三种目的突变.结论:单引物PCR法解决了常规定点突变方法中多个PCR反应,程序繁琐及突变效率低等问题,是一种简便、快速、有效的基因工程定点突变新方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑妍鹏	北京交通大学生命科学与生物工程研究院	15	52	4.0	7.0
2	何金生	北京交通大学生命科学与生物工程研究院	32	86	5.0	7.0
3	付远辉	北京交通大学生命科学与生物工程研究院	14	29	4.0	4.0
4	彭向雷	北京交通大学生命科学与生物工程研究院	8	4	1.0	1.0
5	王烨	北京交通大学生命科学与生物工程研究院	1	0	0.0	0.0
6	王丽男	北京交通大学生命科学与生物工程研究院	1	0	0.0	0.0
7	苏彦斌	北京交通大学生命科学与生物工程研究院	1	0	0.0	0.0