茶树CCoAOMT原核表达及酶促条件优化

• 作者: 唐倩 李勤 李娟 欧淑琼 王坤波 陈丝
• 来源期刊: 湖南农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 咖啡酰辅酶A–O–甲基转移酶 原核表达 纯化 酶促合成
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 生物科学与技术
• 页码范围: 533-537
• 页数: 5页
• 分类号: S571.101
• 语种: 中文
• DOI: 10.13331/j.cnki.jhau.2020.05.006

摘要

优化了重组茶树咖啡酰辅酶A–O–甲基转移酶基因(CCoAOMT)在大肠杆菌中的表达,采用Ni–NTA亲和层析柱对重组蛋白进行纯化.以表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为底物,进行体外酶促反应,采用HPLC测定反应产物EGCG3"Me的生成量.结果表明,CCoAOMT在E.coli BL21中能够高效表达,最优条件为诱导温度37℃,诱导时间4 h,异丙基–β–D–硫代半乳糖苷(IPTG)浓度0.5 mmol/L;重组蛋白经Ni–NTA亲和层析柱梯度洗脱达到了较好的纯化效果;重组酶在体外能够催化EGCG,合成EGCG3"Me,底物EGCG最佳浓度为0.05 mmol/L,最适温度为37℃,最适pH值为4.