靶向MSTN基因shRNA表达载体的构建与鉴定

• 作者: 王丽俊 钮利喜
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 抑肌素 RNA干扰 实时荧光定量PCR 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 165-169
• 页数: 5页
• 分类号: R746
• 字数: 3385字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2020.05.037

摘要

目的 旨在构建靶向MSTN基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,并鉴定其在小鼠体内的抑制效果.方法 根据MSTN基因的mRNA序列(NM 010834.3)设计siRNA,并挑选出3条可能具有良好干扰效果的siRNA,设计合成shRNA,构建pSIREN-MSTN-shRNA表达载体.通过肌内注射法将载体递送至小鼠体内,利用实时荧光定量PCR和Western blot法检测干扰后小鼠肌肉组织中MSTN的mRNA表达量和蛋白质表达水平.结果 测序鉴定表明pSIREN-MSTN-shRNA表达载体构建成功,3个重组质粒均能够明显降低肌肉组织中MSTN的mRNA和蛋白质水平,其中pSIREN-M819表达载体干扰效果最好,与对照组比较,MSTN的mRNA表达量降低了71％,蛋白水平也明显降低.结论 成功构建了pSIREN-MSTN-shRNA表达载体,并在小鼠体内能够有效抑制MSTN基因的表达.