重组CTLA4-Ig融合蛋白糖基化修饰对其功能影响的研究

• 作者: 于传飞 单改仙 朱磊 王兰
• 来源期刊: 药物分析杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4-抗体融合蛋白 融合蛋白 糖基化修饰 N-糖基化 O-糖基化 功能
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 生物检定
• 页码范围: 1391-1398
• 页数: 8页
• 分类号: R917
• 语种: 中文
• DOI: 10.16155/j.0254-1793.2020.08.08

摘要

目的:探讨糖基化修饰对细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4-抗体融合蛋白(CTLA4-Ig)功能的影响.方法:应用多种糖苷酶[N-糖苷酶F(N-glycosidase F)、内切糖苷酶F2(endoglycosidase F2)、唾液酸酶(neuraminidase)和O-糖苷酶(O-glycosidase)]对样品进行处理,获得处理后的样品.首先,应用ForteBio技术,分别测定酶切前后样品与白细胞分化抗原80(CD80)的亲和力;其次,选择报告基因法测定了CTLA4-Ig蛋白的抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(ADCC),以同时反映酶切样品与可结晶段(Fc)受体以及与靶抗原CD80的结合活性变化;最后,选择报告基因法测定酶切样品,阻断Duadi细胞结合并激活Jurkat细胞的能力,以评估其生物学活性.结果:通过ForteBio测定CTLA4-Ig融合蛋白与CD80的亲和力,发现酶切前后亲和力并无明显的变化;测定了不同酶切样品前后的ADCC活性,发现酶切前后的活性都保持在80％～120％的区间内,酶切前后的活性均未发生明显改变;测定了不同酶切样品前后的细胞活性,发现酶切前后的活性都保持在80％～120％的区间内,酶切前后的细胞活性均未发生明显改变.结论:通过多种分析手段研究,发现糖基化修饰对CTLA4-Ig的功能影响不显著.