利用同源重组构建大鼠甘油二酯激酶γ(DGKγ)慢病毒过表达载体

• 作者: 崔慧林 师亮 李蕾 杜家政 谢建山
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 甘油二酯激酶γ DGKγ 同源重组 慢病毒载体 过表达
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 组织构建实验造模
• 页码范围: 260-264
• 页数: 5页
• 分类号: R496|R394.3|R318
• 字数: 5651字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.1992

摘要

背景:慢病毒载体作为外源性转基因载体己被广泛应用,但是大鼠甘油二酯激酶γ(diacylglycerol kinase γ,DGKγ)基因慢病毒载体未见报道.目的:用同源重组的方法构建大鼠DGK γ慢病毒过表达载体.方法:提取成年SD大鼠脑组织总RNA,以反转录得到的cDNA作为模板,通过PCR反应分段扩增大鼠DGKγ基因CDS区5'端1 029 bp和3'端1 362 bp,用同源重组技术将这2个片段与线性化载体进行定向连接,构建CMV-rat DGK γ-GFP慢病毒载体并进行PCR扩增及测序鉴定.经293T细胞包装后产生慢病毒,收集慢病毒感染293T细胞,荧光显微镜下观察细胞中GFP的表达并应用实时荧光定量PCR和Westernblotting法检测细胞中DGKγmRNA和蛋白的表达.结果 与结论:CMV-rat DGK γ-GFP慢病毒载体经PCR扩增和测序鉴定构建成功;经CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒感染后的293T细胞,荧光显微镜下呈GFP阳性,实时荧光定量PCR显示DGKγmRNA的表达较空载体组显著升高(P＜0.01),Western blotting显示DGKγ蛋白表达较空载体组极显著升高(P＜0.001).提示:成功构建了大鼠DGKγ慢病毒过表达载体,DGKγ在293T细胞有效高表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔慧林	山西医科大学组织胚胎学教研室	53	113	6.0	7.0
2	师亮	山西医科大学组织胚胎学教研室	23	72	5.0	7.0
3	谢建山	山西医科大学组织胚胎学教研室	7	18	2.0	4.0
4	李蕾	山西医科大学组织胚胎学教研室	2	8	1.0	2.0
5	杜家政	山西医科大学组织胚胎学教研室	2	0	0.0	0.0