过表达TPL2蛋白PK-15细胞系的建立及其功能验证

• 作者: 刘湘涛 张克山 张大俊 张学刚 徐国伟 李国丽 申超超 郑海学 郝军红 闫鸣昊
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: TPL2基因 PK-15细胞系 FMDV、SVV 慢病毒表达系统
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1319-1324
• 页数: 6页
• 分类号: S852|S65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.07.10

摘要

通过基因合成的TPL2(tumor progression locus 2)质粒,获得稳定表达TPL2的PK-15/TPL2细胞系.将慢病毒栽体Lv-PCDH和TPL2 (Pig)重组慢病毒载体Lv-TPL2 (Pig)利用转染试剂将其转染至PK-15细胞.感染48 h后,加入嘌呤霉素进行药物筛选,通过筛选得到的阳性细胞株PK-15/TPL2即为稳定表达TPL2蛋白的PK-15细胞株.通过qRT-PCR法和琼脂糖凝胶电泳、IFA,TCID50技术验证PK-15/TPL2细胞系和对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)和猪塞内加谷病毒(seneca valley virus,SVV)病原复制的影响.结果 显示,细胞表达大量的TPL2的基因产物,用FMDV、SVV病毒感染稳定表达TPL2的PK-15细胞株时,明显抑制病毒的复制.结果 表明,利用该技术可高效快速地建立了稳定高表达TPL2的PK-15细胞系,该细胞株的建立为病毒的分离及TPL2的生物学活性研究奠定理论基础.