水牛SIRT6基因shRNA干扰慢病毒载体构建与验证

• 作者: 崔佳瑜 杨素芳 石德顺 程隽如 邓彦飞
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: SIRT6基因 水牛 慢病毒载体 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 182-186
• 页数: 5页
• 分类号: S823.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.19556/j.0258-7033.20191015-04

摘要

本研究旨在构建SIRT6基因的RNA干扰慢病毒载体,并在水牛成纤维细胞中验证载体的有效性.设计合成2条特异性水牛SIRT6基因的shRNA序列,分别将其克隆至Psi-LVRU6GP慢病毒干扰载体上,重组质粒通过琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定.将重组质粒与慢病毒包装载体NRF、VSVG共转染293T细胞,荧光显微镜下检查转染效果.转染60 h后收集病毒悬液,并感染水牛胎儿成纤维细胞(BFF),qRT-PCR检测干扰效果.结果 显示:成功构建了2个RNA干扰SIRT6基因表达的慢病毒重组质粒;经慢病毒包装感染水牛成纤维细胞后检测SIRT6 mRNA表达水平,干扰载体Psi-sh1-LVRU6GP、Psi-sh2-LVRU6GP均能有效下调SIRT6的表达,与质粒对照组相比差异显著,Psi-sh2-LVRU6GP的干扰效果最好.SIRT6基因shRNA干扰慢病毒载体的成功构建为研究SIRT6基因对水牛细胞衰老的影响及其机制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	石德顺		241	1058	14.0	21.0
2	杨素芳		78	344	10.0	13.0
3	邓彦飞		15	22	3.0	4.0
4	程隽如		1	0	0.0	0.0
5	崔佳瑜		1	0	0.0	0.0