高表达FcεR1α和共表达NPY-EGFP的RBL细胞系构建及生物学功能检测

• 作者: 黄伦辉 张嘉懿 李柳栩 张蓓 刘运德 李会强
• 来源期刊: 现代免疫学
• 关键词: 细胞系 高亲和力IgE受体α链 神经肽Y-增强型绿色荧光蛋白 特异性IgE
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 89-93
• 页数: 5页
• 分类号: R446.61
• 语种: 中文

摘要

为构建一种高表达高亲和力IgE受体α链(high affinity IgE receptor alpha chain,FcεR1α)和共表达新型标志物神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的 RBL-2H3细胞模型并鉴定其活性,设计FcεR1α-NPY-EGFP序列,构建表达载体pLV-Puro-FcεR1α-T2A-NPY-EGFP-TYK2,对其进行测序鉴定后无内毒素大量提取;经脂质体Lipo2000瞬时转染,于48 h后通过荧光定量PCR、Western blotting、FACS鉴定FcεR1α表达水平;通过传统β-氨基己糖苷酶介质释放试验检测受体的活性,通过NPY-EGFP释放试验检测新型指标的功能.经基因水平、蛋白质水平、膜蛋白表达及功能试验鉴定FcεR1α位于RBL-2H3细胞膜上并有结合人特异性IgE(specific IgE,sIgE)的活性,新型标志物NPY-EGFP可以受刺激分泌.该研究成功构建了一种高表达FcεR1α和共表达新型标志物NPY-EGFP的细胞模型用于检测人血清sIgE.