猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Tsserpin570的克隆表达与酶活性分析

• 作者: 毕研丽 刘仲藜 郭爱疆 张少华 王帅 才学鹏
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 猪带绦虫 丝氨酸蛋白酶抑制剂 Tsserpin570 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 545-551
• 页数: 7页
• 分类号: S852.734
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0068

摘要

为阐明猪带绦虫(Taenia solium)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Tsserpin570)对蛋白酶的抑制作用,通过RT-PCR从猪带绦虫成虫cDNA扩增获得Tsserpin570(TsM_000807300)的完整CDS序列,并构建了 pCold-Tsserpin570原核表达载体,利用发色底物法检测可溶性重组蛋白Tsserpin570对蛋白酶活性的抑制作用.结果显示:RT-PCR扩增获得的Tsserpin570基因片段长1 206 bp,其蛋白的分子质量为46 ku,含有serpin家族特有的反应中心环及DEEGAE和FIVDHPFLFFI家族保守序列.qRT-PCR结果显示,Tsserpin570基因在猪带绦虫成虫和囊尾蚴阶段均有表达,且在成虫的表达量显著高于囊尾蚴的.pCold-Tsserpin570原核表达载体经IPTG诱导表达后获得可溶性重组蛋白Tsserpin570,可被猪囊尾蚴阳性血清识别.基于发色底物法检测Tsserpin570对牛α-胰糜蛋白酶、猪胰弹性蛋白酶、猪胰蛋白酶、人白细胞组织蛋白酶G、人血浆凝血酶、猪胃蛋白酶和木瓜蛋白酶等蛋白酶的活性抑制作用发现,其对牛α-胰糜蛋白酶、胰蛋白酶及弹性蛋白酶的活性均有明显的抑制作用.以上结果提示,Tsserpin570对多种丝氨酸蛋白酶均具有较强的抑制作用.