车前草花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备

• 作者: 苏学思 张玉宝 王若愚 王亚军 唐国亮 金卫杰
• 来源期刊: 浙江农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 百合 车前草花叶病毒 衣壳蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 104-111
• 页数: 8页
• 分类号: S432.4+1|Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-1524.2021.01.13

摘要

为制备车前草花叶病毒(Plantago asiatica mosaic virus,PlAMV)衣壳蛋白(capsid protein,CP)及其多克隆抗体,采用RT-PCR方法从甘肃省种植的切花百合上克隆了PlAMV cp基因的部分序列,连接表达载体pET-28a(+),转化Escherichia coli BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导和Ni-NTA重力柱层析获得了大量纯化的CP融合蛋白,将其作为抗原免疫家兔制备了多克隆抗体.序列分析结果表明,PlAMV cp基因片段大小为621 bp,编码207个氨基酸;与已注册的PlAMV分离物相比,核苷酸序列相似性为74.7％ ～100％,氨基酸序列相似性达到83.6％ ～100％;不同植物PlAMV的分离物序列差异明显,病毒种群分布呈现寄主差异.SDS-PAGE结果表明,CP蛋白在E.coli BL21(DE3)中大量表达,蛋白相对分子质量为24 ku.Western blot结果显示,抗体能够特异结合天然PlAMV病毒蛋白,可用于检测感病材料中PlAMV蛋白的表达量.本研究可以为PlAMV的血清学检测技术开发和致病机理研究提供一定的参考.