南极假丝酵母脂肪酶B基因在大肠杆菌中的表达和发酵优化

• 作者: 吴蓉 曹佳睿 曹君 刘飞翔 杨猛 苏二正
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 南极假丝酵母脂肪酶B 大肠杆菌 可溶性表达 发酵优化
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 138-148
• 页数: 11页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0529

摘要

旨在利用大肠杆菌实现南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因的高效可溶性表达,并降低生产成本.构建带有不同信号肽的CALB基因表达质粒,转化至不同大肠杆菌宿主中,在摇瓶中进行基础培养基、诱导条件、培养基组成成分和进程曲线的优化.结果显示,带有PelB信号肽的重组菌pET25b-CALB-1/Rosetta(DE3)在20℃下使用0.5％(W/V)乳糖在TY培养基中诱导表达效果最好,优化后的合成培养基成分为1.75％(W/V)山梨醇、2.25％(W/V)鱼蛋白胨、1％(W/V)安琪酵母提取物、0.75％(W/V)Na2HPO4.在摇瓶中诱导60 h后,CALB酶活力最高达到35.67 U/mL,相比于初始发酵酶活力提高了17.77倍,是目前大肠杆菌生产CALB的最高水平.成功地构建了大肠杆菌表达系统,经过系统优化后,CALB的高水平可溶性表达得以实现.