大劣按蚊卵黄蛋白原基因cDNA全长序列扩增及功能域蛋白的表达与纯化研究

• 作者: 于莎莎 胡辉 秦杰 王静 刘婷 刘婷婷 王英
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 关键词: 大劣按蚊 卵黄蛋白原基因 RACE扩增 蛋白表达与纯化
• 年，卷（期）: 2021,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学|Basic Medicine
• 页码范围: 1140-1145
• 页数: 6页
• 分类号: Q962|Q963|Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16016/j.1000-5404.202012233

摘要

目的 对大劣按蚊卵黄蛋白原(Anophielesdirus vitellogenin,AdVg)基因cDNA的全长序列进行扩增和分析,并对其功能域蛋白进行表达与纯化.方法 基于前期克隆的AdVg基因cDNA片段,利用RACE PCR技术,扩增AdVg基因的5'末端及3'末端序列.用Vector NTI软件将测序得到的AdVg cDNA片段、5'末端序列、3'末端序列进行校正,拼接得到完整的AdVg cDNA全长序列.对AdVg全长序列进行功能域预测.利用pet28a(+)构建重组质粒进行AdVg功能域蛋白的表达与纯化.结果 成功获得AdVg基因全长cDNA序列,包括117 bp的5'UTR序列、192 bp的3'UTR序列和6 186 bp的ORF序列.AdVg蛋白主要包含Vit N、DUF1943及vWD 3个结构域.通过构建重组质粒,成功表达和纯化了 AdVg VitN功能域蛋白.结论 成功克隆了大劣按蚊卵黄蛋白原基因的全长序列,并获得了重组蛋白.