长双歧杆菌C16 bif黏附基因敲除菌株的构建

• 作者: 谭颖 陈晓倩 付恒芳 朱旭萌 李春 刘丽波
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: bif 黏附 同源重组 敲除
• 年，卷（期）: 2021,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究|Fundamental Research
• 页码范围: 52-59
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2021.07.007

摘要

长双歧杆菌是定植于人体肠道中的优势菌株,与人体肠道健康密切相关.黏附是长双歧杆菌定植于肠道的前提,研究长双歧杆菌的黏附机制尤为重要.bif黏附基因作为长双歧杆菌的一类胞外黏附因子,其敲除后黏附效力是否丧失尚未明确.本试验利用同源重组技术,以长双歧杆菌为研究对象,构建bif黏附基因敲除突变株,验证该基因的黏附作用.首先以长双歧杆菌C16基因中的bif黏附基因和PBR322为模版,扩增bif黏附基因上、下游同源臂和tet抗性基因,然后分别将它们连接到pMD19-t simple Vecter上,对中间载体pMD19-up、pMD19-down、pMD19-tet进行双酶切,并将回收片段连接到PUC18上构成敲除载体PUC18-up-tet-down.通过电转化的方式导入宿主菌株中,利用同源重组筛选获得长双歧杆菌bif黏附基因缺失菌株.菌落PCR和测序结果均显示bif黏附基因敲除菌株构建成功,为进一步研究长双歧杆菌bif基因的黏附作用奠定基础.