奶山羊乳铁蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 钟玉玲 代邦国 杜伟伟 张华文 李纯 史怀平
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: 奶山羊 乳铁蛋白(LF) 抗体制备
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 13-19
• 页数: 7页
• 分类号: Q78|S827.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1182.2022.02.003

摘要

为了制备奶山羊乳铁蛋白的多克隆抗体,为进一步的试验提供材料,该研究运用软件分析并选取最适合原核表达的LF序列进行扩增,将扩增出的序列与pET-32a(+)质粒连接,形成原核表达质粒pET-32a-LF,将质粒转化入大肠杆菌,在最适条件(37℃、0.5 mmol/L IPTG、4 h)下诱导表达出大量蛋白.通过Ni-NTA Resin法将蛋白纯化后皮下注射4月龄新西兰大耳兔,免疫注射结束后采集抗体血清,并用间接酶联免疫吸附法和免疫印迹法检测多抗的效价及特异性.结果显示克隆得到适合原核表达的279 bp的LF CDS片段,pET-32a(+)-LF原核表达载体成功构建并顺利表达(未形成包涵体),表达的截短蛋白大小为10 kD.抗体效价达到1:107;免疫印迹试验结果显示,原核表达的LF蛋白和山羊乳腺上皮细胞中的LF蛋白能够被该抗体特异性识别.