山羊RPL26基因生物信息学分析及对肌内脂肪细胞分化的影响

• 作者: 张浩 王永 李艳艳 罗成 李鑫 李志雄 朱江江 林亚秋
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊 核糖体蛋白 克隆 肌内脂肪细胞 细胞分化
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 所属期刊栏目: 遗传育种|ANIMAL GENETICS AND BREEDING
• 页码范围: 1064-1076
• 页数: 13页
• 分类号: S827.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2022.04.007

摘要

旨在克隆山羊RPL26基因序列并对其在山羊各组织中的表达情况和对山羊脂肪细胞分化的调控作用进行探究.本研究以1周岁简州大耳羊公羊作为试验对象(健康生长状态良好,体重约50 kg,n=3),利用RT-PCR等方法克隆RPL26序列,对基因及蛋白质序列进行生物信息学分析;以山羊各组织cDNA为模板,利用qPCR方法构建组织表达谱;利用双酶切方法构建RPL26过表达载体,通过脂质体转染在山羊肌内脂肪细胞中过表达RPL26,诱导分化后利用油红O染色和Bodipy染色观察细胞形态学变化,qPCR检测过表达效率及成脂相关基因的表达情况,以阐明其对肌内脂肪细胞分化的影响.结果表明,克隆获得山羊RPL26序列544 bp,CDS区为438 bp,编码蛋白质为带负电的不稳定亲水性蛋白质,主要定位于细胞核.RPL26在山羊各组织广泛表达,其中以腹部皮下脂肪和背部皮下脂肪表达量较高,极显著高于其他组织(P＜0.01).在山羊肌内脂肪细胞中过表达RPL26,肌内脂肪细胞的脂滴明显增多,油红O染色OD值极显著上升;qPCR结果显示,Pref1表达水平极显著下降(P＜0.01),PPARγ等成脂标志基因及LPL等脂代谢标志基因的表达都极显著上升(P＜0.01).本研究克隆获得了山羊RPL26序列544 bp,CDS区为438 bp,在腹部皮下脂肪中表达量最高,RPL26对山羊肌内前体脂肪细胞的分化有着正向调控作用.