3种食源性致病菌TaqMan多重荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 王华健 张宁 杨威 赵志强 李茜 陆安 田勇 何欣 赵兴华 李杰峰
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 食源性致病菌 多重荧光定量PCR 检测方法 大肠杆菌O157 ∶ H7 沙门菌 产单核细胞李氏杆菌
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医|PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
• 页码范围: 1201-1209
• 页数: 9页
• 分类号: S855.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2022.04.020

摘要

旨在建立一种可同时快速检测大肠杆菌O157 ∶ H7、沙门菌和产单核细胞李氏杆菌3种食源性致病菌的TaqMan多重荧光定量PCR(qPCR)方法.针对大肠杆菌O157 ∶ H7 rfbE基因、沙门菌invA基因和产单核细胞李氏杆菌hlyA基因的保守序列分别设计特异性引物和TaqMan探针,建立多重qPCR反应体系,进行特异性、灵敏性和重复性试验,应用建立的方法检测生鲜食品中致病菌并与国家标准方法对比.结果显示:建立的多重qPCR方法特异性好,只扩增3种靶细菌;灵敏性最低检测值均为104 copies·μL-1;重复性良好,批内变异系数为0.09％～2.97％,批间变异系数为0.23％～7.82％;对120份生鲜肉样品进行检测对比,两种方法均检出2份大肠杆菌O157:H7,21份产单核细胞李氏杆菌,多重qPCR方法检出14份沙门菌,比国标法多检出1份,建立的方法可检出所有受污染样品.综上表明,建立的多重qPCR检测方法能快速、准确检测食品中大肠杆菌O157 ∶ H7、沙门菌和产单核细胞李氏杆菌3种食源性致病菌,为食品安全提供技术保障.