重组质粒βhCG-pPIC9K的构建及嗜甲醇酵母(Pichia pastoris)的转化

• 作者: 潘善培 肖銮娟 芦春斌 谢琪璇 陈晓丽
• 来源期刊: 暨南大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: βhCG PCR扩增反应 质粒pPIC9K
• 年，卷（期）: 2000,（5）
• 页码范围: 116-121
• 页数: 6页
• 分类号: Q782
• 字数: 3977字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9965.2000.05.022

摘要

目的:为用基因重组技术表达hCG避孕疫苗抗原,构建在酵母细胞中表达的重组质粒βhCG-pPIC9K, 转化嗜甲醇酵母. 方法:根据βhCG的cDNA 序列设计两条引物,使上游带EcoR I酶切位点,下游带Not I酶切位点,以质粒βhCG-PBS KS为模板,进行PCR扩增反应;将所得的DNA片段经EcoR I和Not I双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接,然后导入大肠杆菌DH5α,用PCR筛选阳性克隆并用双酶切鉴定重组子βhCG-pPIC9K. 再用电打孔法转化酵母(Pichia pastoris),用缺组氨酸MD平板筛选阳性株并在含G418的YPD培养基中筛选多拷贝插入菌株. 结果:用所设计的引物扩增出两端分别带EcoR I 和Not I酶切位点的βhCG DNA片段,插入pPIC9K并导入DH5α获得阳性克隆,经PCR 反应和双酶切鉴定表明重组质粒是βhCG-pPIC9K,并转化嗜甲醇酵母获得耐受4 mg/mL G418的菌株. 结论:构建了重组质粒βhCG-pPIC9K并获得插入重组质粒βhCG-pPIC9K的嗜甲醇酵母.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘善培	暨南大学生殖免疫研究中心	32	144	7.0	9.0
2	芦春斌	暨南大学生殖免疫研究中心	32	154	8.0	10.0
3	谢琪璇	暨南大学生殖免疫研究中心	33	138	7.0	10.0
4	肖銮娟	暨南大学生殖免疫研究中心	25	113	6.0	9.0
5	陈晓丽	暨南大学生殖免疫研究中心	1	5	1.0	1.0