应用毕氏酵母高效表达耐高温植酸酶

• 作者: 姚泉洪 张嗣良 彭日荷 李贤 熊爱生 范惠琴 郭美锦
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 热稳定植酸酶 基因合成 高效表达 毕氏酵母
• 年，卷（期）: 2002,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 725-730
• 页数: 6页
• 分类号: Q55
• 语种: 英文

摘要

自然界很难获得大量的耐高温植酸酶. 采取连续延伸PCR 方法, 按照毕氏酵母的偏爱密码, 合成1.3 kb 烟熏曲霉耐高温植酸酶基因fphy. 合成基因与野生型基因核苷酸序列同源性为74%, 但编码的氨基酸序列一致. 将耐高温植酸酶基因fphy插入毕氏酵母高效表达载体pPIC9中, 与分泌信号肽序列融合, 通过同源重组将耐高温植酸酶基因整合到酵母染色体中, 通过SDS-PAGE检测和表达产物的酶活性筛选, 得到重组转化子, 证明植酸酶获得有效分泌和高效表达. 经过5 L小罐高密度发酵, 蛋白质表达量为5.6 g/L; 每毫升发酵液中植酸酶的活力单位达130 000 u; 表达产物耐高温性很强, 90 ℃处理80 min后仍有40%的活性.