幽门螺杆菌18000u外膜蛋白编码基因的克隆及表达

• 作者: 姜政 汪志群 王丕龙 蒲丹 陶小红 黄爱龙
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 幽门螺杆菌
• 页码范围: 266-270
• 页数: 5页
• 分类号: R57
• 字数: 7094字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2002.03.005

摘要

目的:构建含幽门螺杆菌(Hp)18000 u外膜蛋白编码基因的重组载体并在E.coli BL2l中表达.为Hp的疫苗开发、快速诊断试剂盒的研究奠定基础.方法:用PCR从Hp染色体中,扩增18000 u外膜蛋白编码基因片段.将目的基因与pET32a(+)同时经BamH I,HindⅢ双酶切、纯化、连接,转化含有目的基因的重组载体.以含目的基因片段的重组载体转化大肠杆菌BL21(DE30)并表达.表达产物经纯化后,用ELISA法检测其抗原性.结果:经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hpl8000 u的外膜蛋白编码基因,与Tomb等报道相比较,有2%编码基因发生变异,1.7%氨基酸残基改变.经SDS-PAGE分析发现,融合基因表达的蛋白为38000 u,其中pET32a(+)表达的蛋白约为20000u,可溶性表达产物占全菌总蛋白的21.3%.重组蛋白经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95%以上.ELISA法检测显示,该重组蛋白可被Hp阳性患者的血清所识别,具有良好的抗原性.结论:成功地克隆并表达Hp18000 u的外膜蛋白编码基因,为Hp蛋白质疫苗的研制和快速诊断试剂盒的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王丕龙	重庆医科大学第一附属医院消化科	151	971	16.0	24.0
2	蒲丹	重庆医科大学第一附属医院消化科	22	154	7.0	12.0
3	黄爱龙	重庆医科大学肝炎研究所	236	1190	16.0	23.0
4	陶小红	重庆医科大学第一附属医院消化科	82	426	11.0	16.0
5	姜政	重庆医科大学第一附属医院消化科	117	472	10.0	15.0
6	汪志群	重庆职工医学院生理教研室	3	10	2.0	3.0